RHD genotyping kan derfor benyttes ved tvetydige serologiresultat, for eksempel ved genetiske varianter eller hos multitransfunderte pasienter som kan ha en stor andel «fremmede» erytrocytter. Det er også svært aktuelt i prenatal noninvasiv RhD-diagnostikk for å undersøke om en gravid RHD-negativ kvinne bærer på et RHD-positivt foster slik at prenatal «RhD profylakse» kan gis for å hindre immunisering. Cellefritt foster-DNA sirkulerer i mors plasma og kan detekteres i små mengder med nyere molekylære metoder.
I motsetning til andre nukleinsyreamplifikasjonsmetoder, er LAMP en teknologi som verken krever avansert teknisk utstyr eller spesialisert kompetanse på laboratoriene. Hundhausen og medarbeidere viste i Bioingeniøren nr. 3, 2014, at LAMP-metoden prinsipielt kan benyttes til påvisning av RHD-genet. Analytisk sensitivitet og spesifisitet var høy i deres studie, og indikerte at metoden er sensitiv nok til å påvise konsentrasjoner av mål-DNA som er like lavt som fritt føtalt DNA i plasma hos gravide kvinner (1). Forfatterne konkluderte med at flere eksoner og flere personer med mer variert etnisk bakgrunn burde testes for å vurdere om metoden kunne benyttes klinisk til RHD genotyping.
Nå har forskningsmiljøet videreutviklet metoden og testet et større utvalg av prøver for vurdering av diagnostisk sensitivitet og spesifisitet.
- Selve deteksjonen er endret til å benytte malachitgrønt som indikator. Malachitgrønt gir et bedre visuelt skille mellom positive og negative prøver, samt raskere resultater enn den tidligere indikatoren hydroxynaftolblå (figur 1). Med denne optimaliseringen er LAMP-inkubasjonstiden redusert fra 75 til 25 minutter.
- I den opprinnelige artikkelen ble kun RHD ekson 7 genotypet. I det nyere arbeidet er også RHD ekson 10 inkludert slik at to regioner i RHD kan types. Dette er viktig for å fange opp RhD-varianter med insersjoner, mutasjoner eller delesjoner av deler av RHD-genet (2).
- Til nå er 62 personer med kjent RhD-blodtype RHD-genotypet ved hjelp av LAMP-metoden for RHD exon 7 og/eller 10. Diagnostisk spesifisitet og sensitivitet er estimert til henholdsvis 95 % og 100 %. RHD-genotyping ved bruk av LAMP kan predikere RhD-fenotyper med høy diagnostisk nøyaktighet (98 %) og er en lovende metode til klinisk bruk i RHD genotyping.
Forskningsgruppen arbeider nå med å øke spesifisiteten ytterligere og overføre analysen til et klinisk brukbart format.
